产品目录

RIPA裂解液I对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强的裂解作用，可能是经典的、最常用的细胞组织裂解液。使用RIPA Lysis Buffer制备用于Western Blot及免疫共沉淀的裂解产物已经是一种首选的操作标准，适用于大部分抗原表位的检测，特别适用于免疫共沉淀检测蛋白质-蛋白质之间的相互作用胞浆磷酸化蛋白和细胞核转录因子检测等。本制品由裂解液和蛋白酶及磷酸酶抑制剂（100mL规格的仅包含裂解液）组成，每次可以处理10⁷个细胞或100mg组织。

• 进行裂解时，如果有必要，请加入所提供的蛋白酶（溶液B）及磷酸酶（溶液C）抑制剂，否则容易使蛋白质降解及蛋白质磷酸化被破坏。
  
• RIPA裂解液中蛋白样品含有较高浓度的去垢剂，不建议使用普通的Bradford法，但可用BCA蛋白质定量检测试剂盒(货号：GS1480)或改良型Lowry法蛋白浓度测定试剂盒(货号：GS1487)测定蛋白浓度。
  
• 在细胞裂解时，如果在进行步骤5前裂解液比较粘，可以先匀浆或超声以剪断基因组再离心取上清。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 使用后请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。

• 培养细胞裂解
  
  • 贴壁细胞去除培养液，用1X PBS洗一遍。悬浮细胞离心收集，用1X PBS洗一遍。洗去血清中lgG干扰对免疫共沉淀是有益的，但对Western Blot可能并非必要。
    
  • 先将1mL溶液A、1μL溶液B和5μL溶液C在无菌EP管中混匀制成溶液D。
    
  • 向每10⁷个细胞或100mm培养板或150cm2培养瓶中加入已混匀制成的溶液D，使之与细胞充分接触。
    
  • 冰上放置5～10min，为促进细胞裂解，可用枪头轻轻吹打或超声破碎细胞，每次10sec，2～3次，每次间隔5sec，置于冰上冷却，超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％。
    
  • 轻轻倾斜培养皿使裂解产物流向瓶皿的一边或一角，然后将之转移到1.5mL离心管中，在冰上放置5min，期间剧烈振荡3～4次，每次30sec。
    
  • 12000rpm（12830g），4℃离心5min，取上清即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
• 组织块裂解
  
  • 先将1mL溶液A、1μL溶液B和5μL溶液C在无菌EP管中混匀制成溶液D。
    
  • 组织剪切成细小的碎片，每100mg组织加入已混匀好的溶液D，置玻璃匀浆器冰上均质30～50次，同时观察组织是否已经完全裂解并没有明显的小组织块。
    
  • 将匀浆物转移到1.5mL离心管中，在冰上放置10min，期间剧烈振荡3～4次，每次30sec。
    
  • 12000rpm（12830g），4℃离心5min，取上清即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。